kolegij: METODE ISTRAŽIVANJA PROTEINA
voditelji kolegija: prof. dr. sc. Marijana Krsnik-Rasol
Kratki sadržaj:
Svojstva i klasifikacija biljnih proteina. Proteini kloroplasta i mjesto njihove sinteze. Proteini kao rezervna tvar u biljaka, izvanstanični proteini. Osnovni principi razdvajanja proteina - elektroforeza u poliakrilamidnom i agaroznom gelu. SDS-elektroforeza, izoelektrično fokusiranje, 2-D elektroforeza.PRAKTIKUM: Ekstrakcija proteina iz biljnih tkiva. Priprema otopina i pufera. Homogeniranje biljnog tkiva. Centrifugiranje (diferencijalno ili u koncentracijskom gradijentu). Kvantitativno određivanje proteina u biljnom ekstraktu. Priprema uzoraka za elektroforezu (koncentriranje, pročišćavanje, denaturiranje). Elektroforeza u nativnim i denaturirajućim uvjetima. Izoelektrično fokusiranje i dvodimenzijska elektroforeza. Bojanje proteina (Coomassie blue, srebrov nitrat), reakcije za dokaz peroksidaza i esteraza. Analiza gelova i određivanje približne molekularne mase. Prijenos proteina na membranu. Detekcija glikoproteina.
Skripta iz Metode istraživanja proteina za 2005. god. je dostupna za download u Adobe Acrobat .pdf ili Microsoft Word .doc obliku. Za skidanje skripte, kliknite desnim dugmetom miša na link i odaberite opciju "Save link as...".
Izbor literature:
Bollag D. M., Edelstein S. J. Protein methods. Wiley.Liss 1991.
Krsnik-Rasol M, Čipčić H. Elektroforetska anaiza proteina u biljnim ekstraktima. Interna skripta, BioloŠki odsjek PMFa 1999.
Andrews A. T. Electrophoresis. Clarendon Press Oxford 1986.
Dunn M. J. Gel electrophoresis: proteins. Bios Scientific Publishers, 1993.
Richter R. Biochemie der Pflanzen. Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 1996.
PMF, Zagreb, 2004